iGEM竞赛团队采访医院临床检验科医生

2022年3月22日晚8:00，我们对Y老师、L老师展开了线上采访。

Y老师现任厦门大学妇儿医院临床检验科副主任、检验医学副教授，主要研究方向为临床免疫学和临床分子诊断学。L老师现任妇女儿童医院临床检验科的实验室研究员，主要研究方向是生物传感器和临床分子诊断学。此次采访中，我们与两位老师就利用等温扩增技术 (Catalyzed Hairpin Assembly，英文缩写即CHA)进行核酸检测进行了讨论。

在简要介绍完我们的设计思路后，我们向两位老师询问了课题设计方向上较为关心的几个问题。

首先是关于CHA特异性的问题。老师告诉我们，CHA特异性的关键在检测序列的选择。检测序列不仅应具有保守度，还需要有成茎环的特异性，而茎环在不同环境中，可以生成的最稳定二级结构也是不同的。如果非目标结构较多，则会产生假阳性。因此检测序列设计最重要的是使其形成二级结构的茎环尽可能少，这一目的除了可以通过软件评估来实现，还可利用更方便的电泳方法看结构。L老师用自己的研究实例向我们展示了电泳方法，如果同一样品可以得到多个条带，则说明有多个二级结构，表明该序列特异性不太好。

此外，灵敏度和特异性是相互矛盾的。CHA灵敏度很高，检测限度可达到10 -15mol /L，我们检测的物质浓度远比该检测限度高，此时重点考虑的问题不是灵敏度，而是特异性。同时要注意，在我们使用的范围内检测物浓度和信号表征是否仍旧呈线性相关。

随后，我们询问了关于CHA成本的问题。老师告诉我们，CHA每检测一次就加一次探针，只需要合成核酸序列，成本特别低。同时由于我们的检测样本浓度远高于CHA的检测限度，所以不需要进行信号放大，成本会更低。然而，由于我们检测的是单链，而靶标DNA是双链，所以需要一个将双链转换成单链的过程。

此外，老师还提到，由于利用发卡结构检测实际样品时容易受到干扰，因此他们实验时会去检测哪些因素会对靶标检测性有干扰 ，其先后顺序为：触发序列长度、温度、反应时间、茎环浓度和比例。同时，CHA在细菌检测上用的比较少，在老师看来，我们的设计是一个创新点。

最后，两位老师一致认为我们设计的这种体系是能满足实用性需求的。同时，他们也认可了我们的课题，并表示他们的实验室也有这方面的项目正在进行，很乐意向我们提供帮助。